鼠尾胶原蛋白 I 型是通过 Birkedal-Hansen 的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。本公司鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。

　　1，在使用鼠胶原蛋白 I 型包被的细胞培养皿中检查到 PC-12 细胞的贴壁和生长。

　　2，在 1mg/ml 浓度以上，pH 为 7 左右时可形成具有一定强度的三维胶，检查到 NIH-3T3 细胞在三维胶内正

　　常生长、PC-12 细胞在三维胶表面正常生长。

　　使用方法：

　　1、细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度： 1-5ug/cm2

　　以包被浓度为 2 ug/cm2为例：用无菌 0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到 0.012mg/ml。 表面积(CM2，每孔或每皿)加入0.012mg/ml 胶原的体积(uL)

　　96孔细胞培养板0.350

　　24孔细胞培养板1.9300

　　12孔细胞培养板3.8600

　　6孔细胞培养板9.51580

　　35mm细胞培养皿81330

　　60mm细胞培养皿213500

　　100mm细胞培养皿559170

　　确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后，用PBS洗3-4次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3个月以上的时间。

　　2、三维胶原的制备

　　鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/mL以上，pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶，建议成胶浓度1-2mg/mL。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06×体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。

　　需要的溶液(均需要无菌、预冷)：10×PBS(可含10 mg/L的酚红用于pH指示)或10×培养液，0.1mol/L NaOH，0.1mol/L 乙酸(一般不用)，双蒸水

　　A. 不含细胞的三维胶原的制备(以配制1mL，1mg/mL三维胶为例)：将200μL鼠尾胶原蛋白I型(5mg/mL)加到置于冰浴的离心管中，加入 690μL H2O。然后加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结)，立即混匀。再加入100μL 10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

　　B.含细胞的三维胶原的制备(以配制1 mL，1mg/mL三维胶为例)：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200μL鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/mL)加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12μL 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结)，立即混匀。再加入23μL 10×PBS或10×培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760μL的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。

　　注意事项：

　　鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。

　　温馨提示：不可用于临床治疗。