EMSA检测

　　凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异)， 和其它非相关的片段(非特异)，来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

　　一、服务流程：

　　1、核蛋白样本提取与蛋白定量。

　　2、生物素标记DNA3’端并去吹TdT。

　　3、Super-Shift反应，配制6.5%聚丙烯酰胺凝胶，配制好各反应体系，EMSA室温结合反应20min，电泳上样。

　　4、电转膜，操作方法同常规Western blot转膜操作。

　　5、紫外交联，将核酸交联于PVDF膜上。

　　6、化学发光法检测生物素标记的探针。

　　二、客户提供：客户提供组织、细胞样品

　　三、结果提供：实验数据分析、实验方法及样品EMSA电泳图。