细胞划痕实验

　　细胞划痕是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。其实验原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。细胞划痕在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程，是研究细胞迁移的体外试验方法中最简单的方法。

　　实验主要步骤：

　　1. 质粒转染细胞：

　　准备A549细胞，转染前一天按照70-80%密度铺在6cm培养皿中。16h后，按照转染试剂说明书转染细胞(8μg质粒，20μL lipofectamine 2000转染试剂) 。转染24h后，重新铺盘，密度为30-40%。

　　2. 划线;

　　待细胞完全贴壁后，用200μL tip轻轻划线，垂直90度，用力均匀，确保划线处无细胞。

　　3. 细胞培养及拍照;

　　每隔3天换一次新鲜培养基。连续几天倒置显微镜下100X下拍照，记录细胞的迁移情况，直到细胞填满划痕处。

　　4. 统计分析。

　　划线两侧间距为average gaps(AGs)，使用Image-Pro Plus软件分析各组细胞的AGs。