动物模型构建丨特发性血小板减少性紫癜(ITP)小鼠模型构建及应用研究

特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic Thrombocytopenic Purpura, ITP）是一种获得性自身免疫性出血性疾病，以血小板破坏增加和生成受损为特征。建立稳定可靠的动物模型是研究ITP发病机制和开发新疗法的关键。

本文系统介绍了采用豚鼠抗小鼠血小板血清（GP-APS）诱导Balb/c小鼠建立ITP模型的完整方法，包括血小板抗原制备、异源免疫血清生产、模型诱导及评价体系。该模型能够较好地模拟人类ITP的临床特征，表现为血小板计数下降、出血倾向及免疫紊乱，为药物筛选和机制研究提供了理想的实验平台。

ITP小鼠模型构建与评价

模式动物品系

动物：SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为8w-10w，体重为20g-25g。

主要试剂与仪器

完全弗氏佐剂（CFA）、不完全弗氏佐剂（IFA）
草酸铵、血小板洗涤液
全自动血细胞分析仪
流式细胞仪
低温高速离心机

实验分组

实验设6组，每组10-12只小鼠：

A组：正常对照组（生理盐水）

B组：模型组（GP-APS）

C组：阳性药组（GP-APS + 泼尼松）

D组：受试药低剂量组

E组：受试药中剂量组

F组：受试药高剂量组

血小板抗原制备

供体Balb/c小鼠眶静脉取血，置于含抗凝剂的离心管中，静置30 min
200g离心20 min，吸取上清（富血小板血浆，PRP）
800g离心10 min，弃上清，沉淀即为血小板
加入2-3 mL 1%草酸铵溶液，静置5 min溶解红细胞
800g离心10 min，弃上清
加入血小板洗涤液重悬，800g离心10 min，重复洗涤1次
最终以少量血小板洗涤液重悬，计数调整至所需浓度

图：血小板混悬液（油包水状）

豚鼠抗小鼠血小板血清（GP-APS）制备

免疫方案：

第0周：取上述血小板与等量完全弗氏佐剂（CFA）充分乳化至油包水状，于豚鼠双足掌、背部皮下多点注射，至少6点，每点100 μL
第1、2、4周：血小板与等量不完全弗氏佐剂（IFA）乳化，同样方式加强免疫

血清采集与处理：

第5周，豚鼠腹主动脉采血：

室温静置30 min后，1800g离心10 min，收集血清；

56℃水浴30 min灭活补体；

生理盐水稀释后分装，-20℃保存备用。

ITP小鼠模型诱导

模型组及给药组小鼠按以下方案腹腔注射GP-APS：

剂量：100 μL/20g体重
稀释度：1:2（生理盐水稀释）
注射时间点：第0、2、4、6、8、10天（隔日注射，共6次）

正常对照组同期注射等量生理盐水。

模型评价体系

[ 一般体征观察 ] .

每日观察并记录以下指标：

精神状态：活动度、反应灵敏度、扎堆现象

出血表现：皮肤瘀点、瘀斑（尤其注射部位、四肢、尾部）

皮毛状态：光泽度、整齐度

饮食与体重：摄食摄水量、体重变化

死亡情况

[ 外周血血小板计数 ] .

于造模后第0、2、4、6、8、10、14天经眶静脉取血，采用全自动血细胞分析仪检测血小板计数。ITP模型成功的标准为血小板计数较基线下降≥70%或绝对值<50×10⁹/L。

血液细胞分析仪检验报告

[ 骨髓巨核细胞检测 ] .

实验结束后处死小鼠，剥离胸骨，制备骨髓涂片，瑞氏染色后光学显微镜下计数巨核细胞总数及产板巨核细胞比例。ITP模型的特征表现为巨核细胞总数增多但产板巨核细胞减少。

[ 免疫学指标检测 ] .

采集外周血分离血清，ELISA法检测血小板相关抗体（PAIgG）水平。流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群（CD4⁺、CD8⁺、Treg、Th17）比例。

[ 脾脏指数 ] .

称取脾脏重量，计算脾脏指数 = 脾重(mg) / 体重(g)。ITP模型小鼠常表现为脾脏肿大。

ITP小鼠建模典型结果

模型小鼠一般体征

自第2次注射GP-APS后，模型组小鼠逐渐出现典型ITP表现：

出血表现：注射部位、四肢及尾部出现明显皮下紫癜

精神状态：第4天开始出现精神萎靡、眯眼、扎堆、反应迟钝、行动迟缓，甚至行走不稳

皮毛与体重：毛色枯槁、散乱竖起，进食饮水量减少，体重进行性下降

这些表现与人类ITP患者的临床特征高度相似。

血小板计数变化

模型组小鼠在注射GP-APS后24小时即出现血小板显著下降，第4-6天降至最低点，之后维持在较低水平。阳性药泼尼松可部分逆转血小板减少。

骨髓与免疫学改变

骨髓涂片显示模型组巨核细胞总数较正常组增加，但产板巨核细胞比例显著下降，呈现“成熟障碍”特征。同时，模型小鼠PAIgG水平升高，Th1/Th2比值失衡（IFN-γ升高、IL-4降低）。

ITP小鼠模型应用场景

药物药效筛选与评价

ITP模型是目前应用最广泛的药效评价平台。可用于评估：

新型免疫抑制剂的治疗作用
中药复方（如血美安、归脾汤、凉血消斑饮）的免疫调节效应
TPO-RA类药物（如罗米司亭）的促血小板生成作用

发病机制研究

基于该模型可深入探索ITP的分子机制：

Notch信号通路在巨核细胞成熟障碍中的作用
Th17/Treg失衡与疾病进展的关系
血小板凋亡与自身抗体产生的关联

病证结合模型

在ITP模型基础上可叠加中医证候因素（如气血两虚证、血热妄行证），建立病证结合模型，用于中医药“辨证论治”研究。

END

GP-APS诱导的ITP小鼠模型是目前应用最广泛的免疫性血小板减少症模型，其优势在于操作相对简便、造模周期短（约2周）、模型稳定性好。该模型能够较好地模拟人类ITP的三大核心特征：血小板减少、出血倾向及免疫紊乱。

然而，该模型也存在一定局限性。被动免疫法产生的是急性、自限性的血小板减少，与人类慢性ITP的持续性自身免疫状态存在差异。此外，外源性抗血清的反复注射可能导致小鼠产生抗豚鼠免疫球蛋白抗体，影响模型的长期稳定性。未来可考虑开发主动免疫模型（如用大鼠血小板免疫小鼠）或基因工程模型（如FcγRIIb敲除小鼠）以更好地模拟慢性ITP。

尽管如此，在药物筛选和机制验证阶段，GP-APS诱导模型仍是不可或缺的研究工具。结合流式细胞术、ELISA及组织病理学技术，该模型可提供丰富的药效评价数据。

代轩生物丨动物模型构建服务

▸ 百种成熟模型 ▸ 全流程质控 ▸ 数据可溯可靠

核心服务矩阵

服务模块	覆盖能力	技术亮点
动物模型构建	✔ 覆盖神经、心血管、代谢、肿瘤、免疫等8大系统 ✔ 120+ 疾病模型成熟建模（如HIRI、卒中、糖尿病、帕金森）	移植瘤PDX/CDX、手术精细化造模
生理功能检测	✔ 心功能超声（超声心动图） ✔ 无创血压监测 ✔ 神经行为学（水迷宫、旷场等） ✔ 运动功能（转棒、步态分析）	小动物活体成像同步支持
精准指标分析	✔ 全自动生化检测（ALT/AST/Cr/BUN等） ✔ 血常规+凝血功能 ✔ 组织病理+免疫组化 ✔ ELISA/流式细胞术	支持多时间点动态监测
全流程支撑	动物饲养→模型构建→表型验证→数据分析→报告交付	实验-检测-解读一体化