实验室高频技术 PK：免疫组化与免疫荧光，看完不再混淆！
免疫组化（IHC）和免疫荧光（IF）这两种实验都是病理分析常用的技术，那么他们都有哪些区别呢？
01、基本原理
免疫组化/ IHC
基于抗原-抗体反应，通过酶标记二抗（如HRP或碱性磷酸酶）催化显色底物（如DAB）生成不溶性有色沉淀，定位目标蛋白。
检测工具：普通光学显微镜。
免疫荧光/ IF
同样利用抗原-抗体特异性结合，但二抗标记荧光素（如FITC、Cy3），在特定波长激发下发光。
检测工具：荧光显微镜或共聚焦显微镜。
02、实验流程对比
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步骤 |
免疫组化 |
免疫荧光 |
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固定与切片 |
石蜡/冰冻切片，甲醛固定 |
同左，但更常用冰冻切片 |
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抗原修复 |
需高温或酶处理恢复抗原表位 |
类似，但可能更温和 |
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封闭 |
使用血清或BSA阻断非特异性结合 |
同左，可能加入抗淬灭剂 |
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一抗孵育 |
特异性一抗结合目标蛋白 |
同左 |
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二抗孵育 |
酶标记二抗（HRP/AP） |
荧光素标记二抗（FITC/Cy3） |
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显色/封片 |
底物显色（如DAB呈棕色），苏木素复染，封片 |
直接封片（含抗淬灭剂），避光保存 |
03、核心差异
| 类型 | 标记物与检测 | 多重检测能力 | 分辨率与灵敏度 | 样本保存 |
| IHC | 酶促显色，颜色持久； | 需复杂轮次显色。 | 分辨率受限于光学显微镜。 | 切片可长期保存； |
| IF | 荧光信号，需避光且易淬灭。 | 可多色标记（不同荧光素） | 灵敏度更高，共聚焦显微镜可三维成像； | 需避光且尽快观察。 |
04、应用场景
免疫组化/ IHC：临床病理诊断（如乳腺癌HER2检测）、组织定位研究。
免疫荧光/ IF：科研共定位分析（如线粒体与蛋白共标记）、高分辨率成像、活细胞动态追踪。
05、优缺点总结
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技术 |
优点 |
缺点 |
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IHC |
结果稳定、成本低、易保存 |
灵敏度低、多重检测难、分辨率有限 |
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IF |
高灵敏、多色检测、高分辨率 |
荧光易淬灭、设备昂贵、操作需避光 |
06、选择依据
目的：临床诊断选IHC；科研高分辨或多色选IF。
设备：有无荧光显微镜？
样本：是否需要长期保存？
成本：IF试剂及设备投入更高。
示例应用
IHC案例：结肠癌活检中Ki-67蛋白检测，评估细胞增殖活性。
IF案例：神经元中突触前蛋白（绿色）与突触后蛋白（红色）共定位分析。
常见误区
误区：“IF只能用于冰冻切片”。
正解：IHC和IF均可用于石蜡或冰冻切片，但石蜡切片需抗原修复更彻底。
通过以上对比，可清晰区分IHC与IF。二者并不存在孰强孰弱之分，都是免疫技术的典型手段，可根据实际的实验需求选择适合的技术。
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代轩生物IHC/IF部分图示
代轩生物免疫组化、免疫荧光服务项目报告形式：实验片子、实验照片、分析报告。
本次关于免疫组化（IHC）与免疫荧光（IF）的技术探讨至此暂告一段落。
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