细胞培养
细胞增殖实验（以CCK-8法为例）
目的
检测细胞数量随时间或处理条件的变化，评估细胞生长活力、药物抑制或促进效果。
原理
- CCK-8试剂中含有水溶性四唑盐 (WST-8)。
- 活细胞线粒体内的脱氢酶能将WST-8还原成高度水溶性的橙黄色甲臜(formazan)染料。
- 甲臜染料的数量与活细胞的数量成正比。
- 通过测量450nm处的吸光度(OD值)，可以间接反映活细胞的数量和增殖情况。
步骤
✔ 细胞铺板
将处于对数生长期的细胞消化计数，按预实验确定的最佳密度（通常使对照组终止时的OD值在0.8-1.2之间）均匀接种于96孔板中（每孔通常100μL培养基）。设置空白孔（只有培养基+CCK-8，无细胞）、对照组（正常培养条件）、实验组（不同处理条件）。每组设置多个复孔（至少3-5个）。
✔ 培养与处理
将细胞板放入培养箱中培养，使细胞贴壁（通常过夜）。然后按实验设计对实验组进行处理（如加药、换含刺激因子的培养基等）。
✔ 加入CCK-8
在预定检测时间点（如0h, 24h, 48h, 72h），每孔加入10μL CCK-8溶液（避免产生气泡）。
✔ 孵育
将细胞板放回培养箱继续孵育一定时间（通常1-4小时，具体时间需预实验确定，以显色明显且不饱和为准）。
✔ 检测
使用酶标仪在450nm波长处测定每孔的吸光度(OD值)。
✔ 数据分析
计算平均值：每组复孔OD值的平均值。
扣除空白：实验组和对照组OD平均值均减去空白孔OD平均值。
计算增殖率/抑制率：
细胞增殖率(%) = 实验组OD均值 / 对照组OD均值
细胞抑制率(%) = 1 - 实验组OD均值 / 对照组OD均值
绘制生长曲线或剂量效应曲线。
注意事项（CCK-8及其他增殖实验通用）
细胞状态：使用对数生长期、状态良好的细胞。
铺板均匀性：实验成功的关键，直接影响复孔间差异。确保细胞悬液混匀，接种动作轻柔快速。
边缘效应：96孔板边缘孔水分蒸发快，培养基成分浓度易变。通常用培养基或PBS填充外围孔，或仅使用中间60孔。
无菌操作：加样过程注意无菌，避免污染。
避免气泡：加样或加CCK-8时产生气泡会干扰读数，需用枪头小心戳破或离心去除。
孵育时间：孵育时间过长会导致甲臜沉淀或颜色过深饱和，需通过预实验优化确定最佳孵育时间。不同细胞系脱氢酶活性不同！
药物干扰：待测药物本身可能有颜色或能与CCK-8反应，需设置“药物+CCK-8+无细胞”对照孔扣除背景干扰。
CCK-8加入量：一般为培养基体积的10%，过多会改变渗透压。
检测时机：确保在颜色稳定期读数，且所有孔读数时间尽量一致。
其他方法选择：根据实验目的选择合适方法。如BrdU/EdU能标记DNA合成期细胞，更特异地反映增殖；细胞计数最直接但繁琐。
